Moreno Ortega, Julia (2024) Detección, discriminación de especie y determinación de carga de parásitos del género Leishmania sp. directo de muestras clínicas. Masters thesis, Universidad de Panamá. Vicerrectoría de Investigación y Postgrado.
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Abstract
La leishmaniasis cutánea es una enfermedad producida por parásitos intracelulares del género Leishmania sp, los cuales tienen una distribución endémica en las provincias de Bocas del Toro, Panamá Oeste, Veraguas, Coclé y Darién, provincias en las cuales se han reportado la presencia de L. panamensis, L. guyanensis, L. braziliensis, L. naiffi, L. amazonensis y L. mexicana, así mismo, se considera a los insectos del género Lutzomyia, Lu. panamensis, Lu. lephitelor, Lu gomezi y Lu. trapidoi como los vectores implicados en la transmisión de la enfermedad zoonótica que afecta entre 2000 a 3000 personas por año, según cifras de la Guía para el Abordaje Integral de la Leishmaniasis del año 2015 en Panamá, respaldado por el Ministerio de Salud (1,2). Con la finalidad de desarrollar técnicas moleculares que permitan la discriminación de especie, detección y determinación de carga parasitaria directo de muestras clínicas se desarrolló un estudio observacional de tipo experimental en donde se reclutaron en un periodo de dos años 65 individuos que asistieron a la Unidad Clínica del Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud (ICGES) con sospecha de leishmaniasis y accedieron a participar voluntariamente en el estudio. Las muestras se obtuvieron mediante raspado directo de las lesiones cutáneas utilizando cepillos citológicos (cytology brush). Para determinar las especies de Leishmania directo de las muestras clínicas se desarrolló una PCR anidada que amplificó un segmento de 1364 pb del gen HSP70 en el cromosoma 28, que codifica para una proteína de resistencia al antimonio. El segmento amplificado demostró tener un límite de detección de 100 fg equivalente a aproximadamente un parásito en condiciones experimentales. El segmento obtenido mediante esta metodología demostró tener suficientes polimorfismos de un simple nucleótido que facilitan la discriminación de especies del género Leishmania mediante amplificación por PCR y secuenciación seguido de análisis filogenético para la asignación de especie. La aplicación de esta técnica permitió la identificación de L. panamensis (83%), una especie del complejo guyanensis relacionada filogenéticamente a L. shawi (16%) y la determinación de la presencia de L. braziliensis (1%) en las muestras estudiadas. Para la detección y determinación de carga parasitaria directo de muestras clínicas se implementó una técnica de PCR en tiempo real (qPCR) basada en sondas taqman que tiene como blanco molecular el ADN mitocondrial del parásito (kDNA). Esta metodología permitió la detección y estimación de la carga parasitaria de las muestras clínicas reunidas en el estudio utilizando un qPCR duplex que adicionalmente utiliza el gen de RNase P humano como control interno de amplificación y normalizador de la carga. La determinación de la carga nos permitió relacionar esta variable con otras variables como tamaño de la lesión, especie de Leishmania, sexo, edad y tiempo de evolución de la lesión. El desarrollo e implementación de estas técnicas moleculares permitirá la detección, discriminación de especie y determinación de carga parasitaria directo de muestras clínicas lo que a su vez facilitará la realización de estudios futuros para evaluar la respuesta a las diferentes alternativas terapeúticas para la enfermedad de leishmaniasis.
| Item Type: | Thesis (Masters) |
|---|---|
| Subjects: | Q Science > Q Science (General) Q Science > QH Natural history Q Science > QH Natural history > QH301 Biology |
| Depositing User: | Fergie Pineda |
| Date Deposited: | 23 Jan 2026 19:48 |
| Last Modified: | 23 Jan 2026 19:48 |
| URI: | http://up-rid.up.ac.pa/id/eprint/9988 |
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